大肠杆菌是由大肠埃希氏杆菌的某些血清型所引起猪白 染病总称，在不同品种猪群中均有发生，对仔猪危害较大。大肠杆菌血清型多，抗原复杂，变异大，菌株易产生广泛的耐药陛和多重耐药陛，因此必须采用与本场血清型—致的菌株制成多价自家灭活苗，配合使用敏感药物才能达到最佳的防治效果。现将规模化猪场大肠杆菌病的综合防治方法介绍如下。
1 材料和方法
1．1 材料
1．1．1 大肠杆菌采自豫北某大型猪场中典型的黄痢、白痢发病仔猪；阴性血清、阳性血清、单因子血清 (血清型分别为01、02、05、035、055、0 078、0101、 0⋯、0 、0 0 等)和大肠杆菌标准菌株 ATCC25922，均购自中国兽医药品监察所；金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC17853，均由河南科技学院动物科学学院预防兽医教研室提供。
1．1．2 试验动物2日龄仔猪，由河南科技学院动物科学学院预防兽医教研室提供。 1．1．3 受试药物新霉素、环丙沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、青霉素钾、链霉素、阿莫西林、土霉素、庆大霉素、恩诺沙星、磺胺药、乙酰甲喹、卡那霉素，均由恰威斯生物技术有限公司提供。 1．2 方法 1．2．1 病原分离培养及纯化用无菌棉拭子自病死猪直肠采集粪样，于麦康凯琼脂培养基上划线，经 37℃ 培养24 h后，钩取单个、粉红色、圆形、稍隆起、边缘整齐、表面光滑的中等大小菌落涂片，革兰染色、镜检。将检出的两端钝圆、G一短小杆菌再接种于麦康凯琼脂培养基上培养，多次纯化，直至无杂菌为止。然后分别移至琼脂斜面上，作为纯菌种。
1．2．2 菌种鉴定形态特征与培养特性：对分离菌株的形态与培养特性进行常规糖发酵与生化鉴定，对确定为大肠杆菌的菌株进行致病性、血清学鉴定。将生化鉴定后菌株多点皮下种于2日龄仔猪，接种菌量100亿／只，并设对照，饲养3—7 d，观察；选择致病仔猪的大肠杆菌菌株为该场致病菌株。血清型鉴定：将经生理生化试验鉴定为大肠杆菌的纯培养菌株于普通琼脂培养，用2 mL0．5％ 石碳酸生理盐水洗下以后，以2 000 r／min离心5 rain；取其上清液，8 000 r／min离心10 min；取其沉淀物配成菌悬液，再经121 oC处理2 h，破坏K抗原，即为O抗原；4℃保存，备用。用玻板凝集和试管凝集法进行血清学鉴定，鉴定原场猪大肠杆菌致病菌株血清型。
1．2．3 灭活苗的制备、检验及应用试验扩菌：用接种环分别钩取适量优势血清型(O O∞、O )的菌株，划线于营养琼脂平板表面，37℃培养20～22 h；以灭菌生理盐水洗下菌落作为种子，再均匀涂布于营琼脂平板表面，37℃ 培养20～22 h；以灭菌生理盐水洗下菌落，分别置于灭菌瓶中，用麦氏比浊管法测定其含菌数，使各血清型的菌液含菌数相等。灭活：分别取不同血清型的菌株培养液混合，以灭菌生理盐水稀释至含细菌总数为200 4UmL；加入甲醛使其在菌液中的最终浓度为0．4％ ，37℃灭活 48 h，其间不断摇动；再加入等菌液体积的灭菌20％氢氧化铝胶，最后加入柳硫汞使最终浓度为0．01％ ，混匀，检验，分装。性状和无菌检验：肉眼直接观察灭活苗性状；混匀并取适量灭活苗均匀涂布于营养琼脂平板上， 37℃ 培养3 d后观察。安全性检查：取10只小白鼠，皮下注射灭活苗， 0．1 mL／只，观察1周内生长状况；取10只家兔，皮下注射灭活苗，2 mL／只，观察2 d，期间每4 h测1次体温；取妊娠母猪10头，产前15 d左右肌肉注射灭活苗，4 mL／头，7 d后观察。攻毒试验：随机选取免疫母猪和非免疫母猪所产2日龄仔猪各15头，分另惆制苗细菌悬液按60亿／头进行攻毒，察仔猪哺乳期内的生长隋况，记录仔猪发生黄痢、白痢的头数和死亡隋况，测定其对仔猪的保护率。应用试验：在豫北某种猪场选择健康的妊娠母猪，随机分为3组：第1组用本灭活苗免疫，妊娠母猪产前40天和15天分别肌肉注射，4 mL／头；第2组用市售大肠杆菌多价灭活苗进行免疫作对照；第3组不免疫作对照。观察试验母猪所产仔猪在哺乳期内黄痢、白痢的发生情况和仔猪发育情况，综合判定灭活苗的免疫效果。
1．2．4 致病性大肠杆菌药敏试验按常规方法进行。判断标准：抑菌圈直径大于15 mm为高敏，在 10—15 mm之间为中敏，在10 mm以下为耐药。
1．2．5 敏感药物治疗试验依据药敏试验选用高敏药物，对免疫母猪所产的个别黄痢、白痢仔猪注射 5％头孢噻呋1 mL，每天1次，连用3 d；同时注射新霉素1 mL，每天1次，连用3 d。另外，视情况给仔猪灌服补液盐 电解多维。
2 结果
2．1 生化试验结果生化特I生鉴定结果是分离菌为大肠杆菌菌株。经致病I生鉴定，从原场共分离到致病性大肠杆菌47株。再进行血清型鉴定，其中45株致病性大肠杆菌分属于O蚓 (13株)、O60(10株)、O14(19株)、O 39(7株)、O 蕊(4株)、09 (2株)6个血清型，2株未定型。
2．2 灭活苗无菌检验结果灭活苗静置后分层，上层为澄清液体，下层为乳白色沉淀物，振摇混匀呈均一浑浊液；营养琼脂培养基上无任何细菌生长。 #p#分页标题#e#
2．3 安全性检查结果被检10只小白鼠、10只家兔在试验期内均健活；妊娠母猪产前15天注射，7 d后未出现异常反应，胎儿、新生仔猪在哺乳期内均正常。
2．4 攻毒试验结果攻毒后免疫组新生仔猪在哺乳期内发病2头 (13．33％)，其中1头死亡，死亡率和致死率分别为 6．67％ 、50．00％；攻毒后对照组新生仔猪在哺乳期内发病11头(73．33％)，其中5头死亡，死亡率和致死率分别为33．33％ 、45．45％ 。说明灭活苗对哺乳期内的新生仔猪具有明显的保护作用。
2．5 应用试验结果(见表1)从表1可以看出，灭活(原场)苗对仔猪黄、白痢有明显的预防 果，且效果优于对照苗，说明原场苗对地方I生仔猪黄痢、白痢发病猪也有较强的保护作用。
2．6 药敏试验结果 13种抗菌药物中，致病f生大肠杆菌对头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星和新霉素高度敏感；对恩诺沙星、乙酰甲喹、磺胺药、卡那霉素和阿莫西林中度敏感；链霉素、庆大霉素、青霉素钾和土霉素低度敏感。
2．7 治疗结果 39头患黄痢、白痢的仔猪，通过上述方案治疗，死亡2头，其余的全部康复，治愈率为94．9％。
3 小结与讨论
3．1 合理选择菌种用从猪场分离出的地方致病性大肠埃希菌优势血清型菌株制成灭活苗，免疫当地妊娠母猪，可较好地预防仔猪黄痢、白痢的发生，提高仔猪成活率，克服了普通疫苗由于血清型差异而造成的免疫效果不佳，此方法具有推广价值。在实际生产中，从各猪场分离出的菌株较多，而且不同猪场分离出的致病菌株通常也不相同。因此，要定期从发病猪群分离菌株，根据分离结果，一次性调整灭活苗中的优势菌株，且灭活苗中菌株血清型不宜太多。
3．2 选择敏感药物本场苗在实际应用中仔猪仍有发病，这可能与不同血清型菌株的致病力差异有关，而且不同地区猪致病性大肠杆菌菌株的耐药性有明显的差异。这就要求在临床治疗中进行药敏试验，选取敏感药物治疗才能达到较好的效果。
3．3 加强饲养管理加强妊娠母猪和哺乳母猪饲养管理，母猪舍要保持清洁、干燥，母猪饲喂全价饲料，饲料保持相对稳定。产前5—7 d迁人产房。分娩时用水清洗乳房及外阴部，再用0．1％ 高锰酸钾溶液消毒。弃去最初几滴初乳后再给仔猪哺乳。仔猪要做好保温工作，可以在产圈内设置红外线保温箱。做好及早开食，适时补料。一般从仔猪出生后的第7天开始，选择适口性好、营养丰富、易消化的颗粒料供仔猪自由采食，充分供给清洁饮水，可促进消化器官发育，增强抵抗力，防止下痢。断奶不要太突然，改换饲料要缓慢。适时补给铁和硒，在仔猪出生后的第2天，一次性肌注5％ 右旋糖酐铁2 mL或牲血素等；在缺硒地区，可在仔猪出生后的1—3 d内肌注0．1％亚硒酸钠一维生素E 0．5—1．0 mL，断奶时再注射1次；也可给怀孕母猪产前注射2—3 mL亚硒酸钠一维生素E，加喂抗贫血药，对仔猪黄痢、白痢有预防作用。
3．4 利用生态制剂生态制剂有利于猪肠道正常菌群的建立，不仅能预防仔猪黄痢、白痢，还可预防其他细菌性疾病的发生，同时还可以提高仔猪消化力，促进仔猪生长，提高断奶重，值得规模化养猪场"借鉴。
