回答1、准备工具:准备镊子、EP管、枪头等工具,然后用高压灭菌锅进行杀菌。2、消毒处理:用酒精对手掌、镊子进行消毒,然后取出10支EP管放入试剂盒内。3、放入菌种:用移液枪取出甘油,放入EP管,然后再将菌种放入管内。4、低温保存:盖好盖子,做好标注,将所有菌种都装到袋中,再将袋子置于冰箱内保存。
一、甘油保藏菌种实验步骤
1、准备工具
准备好镊子、EP管、枪头等工具,然后将其放入高压灭菌锅内做杀菌处理。
2、消毒处理
将酒精擦拭在手上进行消毒,并对镊子做消毒处理,再用镊子取出10支EP管并放入试剂盒中。
3、放入菌种
用移液枪取出50%的甘油,然后放入EP管中,再取出菌种放入EP管。
4、低温保存
盖上盖子,并做好标注,然后将所有菌种都装到袋子中(袋子也要做好标注),再将袋子放在-20℃的冰箱内保存。
二、甘油保藏菌种原理
1、保藏原理
甘油可以作为菌种的保护剂,低温冷冻的条件下,使微生物的新陈代谢趋于停止,从而达到长期有效的保藏目的(保藏温度越低,效果越好)。
2、注意事项
(1)应使用非选择性的增菌培养基,因为微生物在选择性培养基中生长时可能会丢失某些生物特性,而且保藏的菌种的生物特性可能和标准菌株的特性有所差异。
(2)菌液的浓度越大,菌种的保存时间一般越长。保藏细菌常使用菌液,保藏霉菌常使用无菌水,或用生理盐水制备成的孢子悬液。
(3)甘油的最终浓度为10-20%。甘油原液过于粘稠,需配制适宜的甘油水溶液,将菌悬液和甘油按照1:1的体积比例充分混匀,再分装至经过灭菌处理的保藏管中,放入-80℃(-70℃)的冰箱内保存。
(4)该方法适合中长期菌种保藏,保藏时间通常是2-4年左右。