回答1、LB培养基制备:准备10g胰蛋白胨,5g酵母提取物,10g氯化钠,加入800ml去离子水,拌匀,直至完全溶解,然后用0.2ml氢氧化钠(5mol/L)将ph调节到7.4,并加入1L去离子水,高压蒸汽灭菌。2、倒平板:培养基放置在60℃水浴锅中保温,取出后,轻轻转动培养基,让琼脂分布均匀。
一、甘油菌菌种活化步骤
1、LB培养基制备
(1)准备10g胰蛋白胨,5g酵母提取物,10g氯化钠,然后加入800ml去离子水,搅拌均匀,直至完全溶解,接着使用0.2ml的氢氧化钠(5mol/L)将ph调节到7.4左右,并加入1L的去离子水,高压蒸汽灭菌20分钟左右。
(2)在高压灭菌之前,应当加入15g/L(铺制平板用)或7g/L(配制顶层琼脂糖用)的琼脂糖。
2、倒平板
(1)超净台、接种环、培养皿,酒精灯等用紫外线灭菌30分钟左右。
(2)高压灭菌后的培养基放置在60℃的水浴锅中保温,等到溶液尚未冷却的时候,将培养基取出,轻轻转动,让琼脂均匀分布在培养基溶液中。
(3)等到冷却至50℃的时候,在超净台中加入抗生素,并旋转将培养基混合均匀,然后从烧瓶中倾出培养基铺制平板。
(4)将甘油菌冻存管放在冰上,直接用接种环在冻存管内的冰渣上蘸一下,然后涂上平板。
3、大量培养
(1)将冷藏的液态培养基重新高温高压灭菌,等到冷却至50℃的时候,加入抗生素,接着将菌落挑至已经加入抗生素的液态培养基中(2-5ml),37℃,200rpm培养8小时左右。
(2)按照1:500-1000的比例,将添加了抗生素的液态LB培养基稀释上一步骤所得菌液(20-25μL菌液+25ml液态LB培养基),37℃,200rpm培养12-16小时。
二、甘油菌怎么保存
1、如果是20%甘油保存菌种(甘油:菌液=20:80),一般放置在零下70℃的环境下保藏。
2、如果是一般细菌的菌种,在纯化后,接种在普通肉汤管中,然后经过4-6小时增菌后,放入适量甘油-生理盐水保存液,在零下20℃的环境下进行保藏。如果是链球菌属和奈瑟氏菌属的菌种,在纯化后,接种在血清肉汤管中,在5-10%CO2中经过8-10小时增菌后,加入适量甘油-生理盐水保存液,放置在零下80℃的环境下进行保藏。如果是真菌菌种,在纯化后,直接取菌洗入肉汤,加入甘油-生理盐水保存液,放置在零下20℃的环境下进行保藏。